Государственная фармакопея Республики Беларусь -
Скачать (прямая ссылка):
tR2 - время удерживания интересующего пика,
tR1 - время удерживания пика сравнения (обычно пик, соответствующий исследуемому веществу),
tM - «мёртвое» время (или объём): время (или объём) или расстояние, измеренное по базовой линии от точки ввода пробы до перпендикуляра, опущенного из максимума пика, соответствующего неудерживаемому компоненту.
В плоскостной хроматографии вместо tR2 и tR1 используются факторы подвижности
Rf2 и Rf1.
ВОСПРОИЗВОДИМОСТЬ (ПРЕЦИЗИОННОСТЬ) КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ
Отношение сигнал/шум
Отношение сигнал/шум (S/N) влияет на воспроизводимость (прецизионность) количественного определения и рассчитывается из уравнения:
S _ 2И_
N ~ h
H - высота пика (Рисунок 2.2.46.-4), соответствующая рассматриваемому компоненту, на хроматограмме, полученной при использовании рекомендованного раствора сравнения, измеренная от максимума пика до экстраполированной базовой линии для сигнала, величина которого эквивалентна двадцатикратному превышению величины ширины пика на половине высоты,
h - размах для фонового шума (уровень шума) на хроматограмме, полученной при введении или нанесении холостой пробы, величина которого эквивалентна двадцатикратному превышению щирины пика на половине высоты для пика на хроматограмме, полученной при использовании рекомендованного раствора сравнения и, если возможно, расположенного на одном и том же расстоянии от места возможного обнаружения пика.
Рисунок 2.2.46.-4.
Сходимость (повторяемость)
Сходимость (повторяемость) отклика выражается в виде рассчитанного процентного относительного стандартного отклонения (RSD %) последовательных серий измерений с участием исследуемой пробы или раствора сравнения и рассчитывается из выражения:
X( Уі — у )
n — i
yi - индивидуальные значения площади пика, высоты пика или отношения площадей в методе внутреннего стандарта,
У - среднее индивидуальных значений, n - число индивидуальных значений.
Максимальное допустимое относительное стандартное отклонение (RSDmax) рассчитывается для серии измерений с участием исследуемой пробы или раствора сравнения для определённых пределов с использованием следующего выражения:
кв4П
RSD
max
190%,n—i
K - константа (0,349), полученная из выражения
„ 0,6 190%,5
K _ ^=х
V2 V6
в котором 06 соответствует требуемому RSD при 6 измерениях для B=1,0,
V2
B - верхний предел, приведенный в определении в частной статье минус 100 процентов, предполагая, что верхний предел установлен согласно воспроизводимости методики,
n- число повторных измерений для раствора сравнения (3 < n < 6),
t90%,n-1- коэффициент Стьюдента t для 90%-ной доверительной вероятности (двухсторонняя критическая область) с n - 1 степеней свободы.
ПРИГОДНОСТЬ СИСТЕМЫ
Тесты на определение пригодности системы являются неотъемлемой частью методики и используются для того, чтобы удостовериться в адекватном функционировании хроматографической системы. Для оценки работы колонки обычно используются следующие параметры: эффективность, концентрационный коэффициент распределения, разрешение, относительное удерживание и фактор асимметрии.
На хроматографическое поведение могут влиять такие факторы, как состав, ионная сила, температура и рН подвижной фазы, скорость потока, длина колонки, температура, давление, а также характеристики неподвижной фазы: пористость, размер частиц, удельная площадь поверхности, а в случае обращённой фазы -
степень химической модификации (блокирование концевых групп, число атомов углерода и т.д.).
Различные компоненты используемого оборудования должны быть проверены на соответствие их качества и должны обладать точностью измерений требуемой для проведения испытания или количественного определения.
Должны быть соблюдены следующие требования при отсутствии других указаний в частной статье.
- Величина фактора асимметрии основного пика должна находиться в пределах от 0,8 до 1,5, если только нет иных указаний в частной статье. Данное требование распространяется как на тесты, так и на количественные определения, описанные в частных статьях.
- Максимальное допустимое относительное стандартное отклонение для повторных измерений для предписанного раствора сравнения не должно превышать величин, приведенных в Таблице 2.2.46.-1. Данное требование распространяется только на количественное определение вещества и не используется в случае проведения испытания на родственные соединения.
- Предел обнаружения пика (соответствующий отношению сигнал/шум равному 3) находится ниже допустимого содержания примеси (порога, ниже которого присутствие примеси отрицается) в тесте на родственные соединения.
